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毛细管电泳分析对进样技术有哪些要求?

发布时间:2021-05-17      点击次数:394

电泳仪:专为进行电泳提供外加电场的直流电源,其输出电压或电流或功率要求相对稳定或按特定规律变化。常用的电泳分析方法主要有:醋酸纤维素薄膜电泳、凝胶电泳、等电聚焦电泳、双向电泳、毛细管电泳。其中,毛细管电泳分析对进样技术要求很高,进样操作事项如下:

1、进样区带越小越好:

    无论采用何种进样方式,毛细管插入样品溶液的深度一般要少于毛细管总长度的1%~2%,以尽量减少样品溶液经毛细吸附进入毛细管而影响进样量的性。样品管中溶液少为5μL,进样体积为1~50nL。

2、进样时间以短为宜:

    通常进样时间为0.5~1s,此时毛细管粘附的样品量相对于吸入的体积可忽略不计。
 虽然毛细管电泳的进样时间可至±0.1s,但由于毛细管插入样品管时不可避免地会粘附一些溶液,进样时间过短会影响分析的重复性。

3、样品预浓缩:

    受毛细管内总体积的制约,对于浓度很稀的样品,毛细管电泳不能象HPLC那样可加大进样量来提高检测灵敏度,但可采取一些措施来改善。
 * 当样品缓冲液的电导明显低于(100倍以上)电泳缓冲液时,毛细管两端加上电压后可在样品区带前后形成一个更大的电场,使样品溶液中的分子迁移的更快。当这些分子到达电泳缓冲液边界时,由于电场减弱,迁移速度减慢,使样品区带由宽变窄,浓度提高,而达到浓缩的目的。
 * 当样品缓冲液和电极缓冲液的电导一样,而样品浓度较稀,不适合再作稀释时,可在进样前先吸入一些水,也能达到浓缩的目的。
    无论采取何种进样方式,上述方法都可使样品堆积浓缩。但由于在堆积区带电势陡降,会导致此区带温度升高。

4、毛细管插入样品溶液后,应立即开始进样操作,完成后迅速移至缓冲液中开始电泳。否则会产生毛细作用和虹吸现象,引起误差并使谱带展宽。

5、电极不要和毛细管接触,样品贮器和缓冲液贮器液面的高度应保持平衡。

6、使系统尽可能保持恒温。因温度直接影响粘度,而影响进样量的恒定。

7、样品溶液中的溶剂必须与缓冲液互溶,前者的离子强度应低于后者。

8、防止样品溶液和缓冲液蒸发、损耗。



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