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毛细管电泳仪的操作指南

发布时间:2022-11-12      点击次数:228
  毛细管电泳仪是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。广泛应用于生物、化学、医药行业,其分离范围覆盖了从离子、化合物等小分子,到蛋白、核酸、糖类等大分子甚至细胞和病毒等。尤其在离子、碱性药物、蛋白等极性化合物的分离中具有突出优势。
  该设备采用紫外检测原理基于被测组分和背景电解质的吸光度不同,当被测组分通过检测窗时,吸光度发生的变化服从朗伯-比尔定律,即在一定的实验条件下,吸光度与被测组分的浓度成正比。
  毛细管电泳仪的操作步骤:
  1. 将设备放置于有空调的房间,保持室温恒定。同时,操作中控制毛细管及仪器恒温。
  2. 缓冲液加压一段时间后,淌度和电渗流会变化,要经常更换。
  3. 缓冲液要用0.45mm微孔滤膜过滤后使用。
  4. 对未涂渍的毛细管柱每天使用前先用0.1mol/L氢氧化钠溶液、水及运行缓冲液各冲洗10min平衡后使用。更换缓冲液时,要用水冲洗3min后,再用缓冲液冲洗10min平衡后进样。
  5. 样品宜溶于稀释5~10倍的运行缓冲液中,以获得好的峰形。
  6. 为提高定量准确性,宜加入一内标。在保证峰形的前提下,样品宜用高浓度,进样时间应大于5psi×sec。
  7. 摸索实验条件时,可先用一短柱,用磷酸盐、硼砂或Tris在不同的pH值条件下试验,当选定缓冲液种类时,可先改变pH值获得*佳分离,再改变浓度以获得较好的峰形及柱效。
  8.实验结束后,用水冲洗5min,可将毛细管两端置于水中保存,也可用氮气吹干后保存。

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